南京医科大学李聚学、南京医科大学附属眼科医院蒋沁、东南大学刘安等人NC论文被评议

学术荟萃2025-04-26 10:19:00山东

Part.1

论文简介


标题:The ARCCRABP1 neurons play a crucial role in the regulation of energy homeostasis

日期:2025年3月8日

单位与作者 南京医科大学 Lihong Yan、Xin Zhang、Juxue Li (通讯作者 音译 李聚学)

南京医科大学附属眼科医院 Qin Jiang(通讯作者 音译 蒋沁)

东南大学生命科学技术学院 An Liu(通讯作者 音译 刘安)

期刊:Nature Communications


Part.2

图像重复问题


#1 作者利用 Cre 依赖性 caspase-3 方法诱导 Crabp1-Cre 细胞凋亡。图 2b 验证了这一策略,显示注射了 AAV-DIO-Caspase3 的小鼠的 ARC 中没有 CRABP1 和 mCherry 表达。然而,左下角的两个面板没有荧光背景,其中一个面板似乎缺乏可见的脑组织。作者能否澄清这一点?



作者 Juxue Li 回应:在绿色荧光通道中,CRABP1 细胞是用抗体染色法检测的。由于二抗带有共轭荧光标记,组织切片中会出现一定程度的绿色背景信号。在共聚焦显微镜成像过程中,我们对参数进行了优化,以尽量减少这种背景,从而使显示的图像中没有明显的背景荧光。不过,在您的增强彩色图像中,仍能看到一些残留的背景信号。


红色荧光信号(mCherry)源于不同载体的表达特性。在 AAV 对照组中,使用的是 AAV-DIO-mCherry 载体,它携带 mCherry 红色荧光蛋白基因,可以检测到红色荧光。相反,AAV-Caspase3 组使用的是 AAV-DIO-Caspase3 载体,该载体不含任何荧光蛋白基因。在 AAV-Control 组中,由于神经元突触中存在 mCherry 蛋白,因此会观察到红色荧光背景,但在共聚焦成像过程中,红色荧光背景被最小化。然而,在AAV-Caspase3组中,由于该载体不表达任何荧光蛋白基因,因此没有检测到荧光信号背景(只看到噪音)。因此,在左下角第二张图像(红色通道)的增强彩色版本中,没有明显的残余背景信号。


优化图像采集的共聚焦参数是共聚焦成像的标准程序。


此外,在 AAV-Control 组显示的绿色通道中观察到的背景信号主要归因于 CRABP1 表达神经元突触内部分 CRABP1 蛋白的定位。然而,在AAV-Caspase3组中,由于所有CRABP1阳性细胞凋亡,这种背景信号消失了。


#2 补充图 1a: 通过 RT-qPCR 评估不同组织中 Crabp1 的表达水平。WAT 和 BAT 的表达水平相同。


基金支持:



  • 非传染性慢性病-国家科技重大专项(2024ZD0530203)

  • 国家自然科学基金(批准号:81570774、82070872、92049118和82370854)

  • 国家 “青年千人计划 ”和南京医科大学创业基金(均为J.L.获得)

  • 江苏省个人创新基金、江苏省创新创业团队(资助编号:JSSCTD2021)(J.L.获全部资助)

  • 科技创新2030-重大项目(2021ZD0201100)任务4(2021ZD0201104)(Y. Z.)

  • 江苏省中医药科技发展计划(MS2023087)(授予 G.Z.)

  • 安徽省应用高峰培育学科生物与医学科学基金项目(202313)(授予 Q.C.)。





参考信息:

https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11890859/
https://www.pubpeer.com/publications/C574624250BED01A5486301A802BC4